免疫佐劑
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免疫佐劑（immunoadjuvant）
又稱非特異性免疫增生劑。本身不具抗原性，但同抗原一起或預(yù)先注射到機(jī)體內(nèi)能增強(qiáng)免疫原性（見抗原）或改變免疫反應(yīng)類型。種類很多，目前尚無統(tǒng)一的分類方法，常用的佐劑可分為4類：無機(jī)佐劑，如氫氧化鋁，明礬等；有機(jī)佐劑，微生物及其產(chǎn)物如分枝桿菌（結(jié)核桿菌、卡介苗）、短小桿菌、百日咳桿菌、內(nèi)毒素、細(xì)菌提取物（胞壁酰二肽）等；合成佐劑，如人工合成的雙鏈多聚核苷酸（雙鏈多聚腺苷酸、尿苷酸）、左旋咪唑、異丙肌苷等；油劑，如費(fèi)氏佐劑、花生油乳化佐劑、礦物油、植物油等。弗氏佐劑目前在實(shí)驗(yàn)動物中最常用，又可分為弗氏不完全佐劑和完全佐劑兩種。不完全佐劑是油劑（石蠟油或植物油）與乳化劑（羊毛脂或吐溫（Tween）80）相混合而成，當(dāng)其再與抗原混合，即成油包水乳劑，可用于免疫注射。在不完全佐劑中加入死的分枝桿菌，即成為弗氏完全佐劑。完全佐劑的免疫強(qiáng)度大于不完全佐劑。該佐劑主要用于動物實(shí)驗(yàn)，不適宜于人類使用。而且動物多次注射后也常會發(fā)生佐劑病。
免疫佐劑的生物作用包括：
（1）抗原物質(zhì)混合佐劑注入機(jī)體后，改變了抗原的物理性狀，可使抗原物質(zhì)緩慢地釋放，延長了抗原的作用時間；
（2）佐劑吸附了抗原后，增加了抗原的表面積，使抗原易于被巨噬細(xì)胞吞噬；
（3）佐劑能刺激吞噬細(xì)胞對抗原的處理；
（4）佐劑可促進(jìn)淋巴細(xì)胞之間的接觸，增強(qiáng)輔助T細(xì)胞的作用；
（5）可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。故免疫佐劑的作用可使無免疫原性物質(zhì)變成有效的免疫原；
（6）可提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴變；
（7）改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并使其增強(qiáng)。
具備條件
佐劑的條件作為一種良好的佐劑，必須具備下列條件：
（1） 增加抗原的表面積，并改變抗原的活性基團(tuán)構(gòu)型，從而增強(qiáng)抗原的免疫原性；
（2） 佐劑與抗原混合能延長抗原在局部組織的存留時間，減低抗原的分解速度，使抗原緩慢釋放至淋巴系統(tǒng)中，持續(xù)刺激機(jī)體產(chǎn)生高滴度的抗體；
（3） 佐劑可以直接或間接激活免疫活性細(xì)胞并使之增生，從而增強(qiáng)了體液免疫、細(xì)胞免疫和非特異性免疫功能；
（4） 良好的佐劑應(yīng)具有無毒性或副作用低的特點(diǎn)。
常用佐劑的種類和制備
佐劑主要可分為兩種：一種本身具有免疫原性，如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結(jié)核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。目前應(yīng)用最多的是弗氏佐劑(Freund adjuvant)。
1． 弗氏佐劑
弗氏佐劑是目前動物實(shí)驗(yàn)中最常用的佐劑，分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據(jù)需要而定，通常為2：1。不完全佐劑中加卡介苗(最終濃度為2～20mg/ml)或死的結(jié)核分枝桿菌，即為完全弗氏佐劑（FCA）。 一般首次注射時用1／2體積FCA加上1／2體積的抗原進(jìn)行乳化，第二次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi)，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，佐劑和抗原體積比一般為1：1，制備成 "油包水"乳狀液。因?yàn)楹琒DS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復(fù)合物，注射入動物體內(nèi)時一定要保持乳化狀態(tài)?？乖昧恳暱乖肿恿坎煌懊庖咴约懊庖邉游锊煌幸欢ú町?，無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和固定模式。一般是每兔（約2kg重）或每羊（約20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進(jìn)行：
（1） 研磨法：先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內(nèi)，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續(xù)研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點(diǎn)是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。
2） 注射器混合法：將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內(nèi)，兩注射器之間以一細(xì)膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點(diǎn)是容易做到無菌操作，抗原損失少，適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全，個別抗原，用塑料注射器根本推不動，而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化完全，為合格的油包水劑。
（3） 超聲：實(shí)驗(yàn)室條件好點(diǎn)的，比如說有超聲破碎儀的，一定要控制超聲頻率和時間，超聲容易激發(fā)一些自由基，對抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。
2． 氫氧化鋁佐劑
取5%硫酸鋁溶液250ml，在強(qiáng)烈攪拌下加入5%氫氧化鈉溶液100ml，用生理鹽水離心洗滌沉淀2次，再懸入生理鹽水中使達(dá)250ml。免疫接種時，取適量氫氧化鋁佐劑加等體積抗原即可免疫。
3． 明礬佐劑
鉀鋁礬(硫酸鋁鉀)在一定pH條件下產(chǎn)生氫氧化鋁膠體吸附抗原而產(chǎn)生佐劑效應(yīng)。制備方法是用生理鹽水溶解蛋白質(zhì)抗原，在攪拌下緩慢滴入一定量10%硫酸鋁鉀溶液，用NaOH調(diào)pH到6．5，此時溶液變成乳狀懸液，離心后去掉上清液，沉淀用生理鹽水洗滌二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存?zhèn)溆?。明礬佐劑一般用于肌肉注射，皮下注射容易引起肉芽腫和膿腫。
4． 脂質(zhì)體
脂質(zhì)體包封抗原后，可使抗原延緩釋放，并且脂質(zhì)體顆粒有刺激機(jī)體免疫反應(yīng)的作用。因此，用脂質(zhì)體包封的抗原免疫動物可提高免疫效果。
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