臨床生物化學/溫度的控制
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要了解此問題，應注意溫度對酶活性影響的雙重性。首先，化學速度隨溫度升高而加快，酶反應也不例外。Q10值即溫度增加10℃，化學速度的變化率。酶的Q10值約在1.5-2.5之間。
溫度與反應速度之間關系，可用Arrhenius方程式來表示：
Logk＝－E/2.303RT+常數(shù)
式中k是反應常數(shù)，T為絕對溫度，R為氣體常數(shù)。E為活化能也是常數(shù)。在酶反應中V＝K.［E］。所以在酶反應中，LogV和1/T作圖為一直線，斜率為－E/2.303R。通過每一直線斜率不難計算出該酶反應的活化能E。
但是，測定酶時都需要酶和底物在一定溫度下作用一段時間，在此期間，溫度有可能使酶失活，不同酶在此方面差異很大，有些酶如胎盤堿性磷酸酶在56℃放置15分鐘，活性也不下降，有些酶如酸性磷酸酶，37℃1小時后，失去50％酶活性。酶的穩(wěn)定性還與其它因素，如作用時間、pH、有無底物、有無其它蛋白等有關。同為堿性磷酸酶，在肝提取液中遠不如血清中穩(wěn)定，37℃作用15分鐘后肝中此酶活性將顯著下降。又如將血清pH降低在pH6.0以下，血清中酸性磷酸酶將長期穩(wěn)定。
圖17-5 預溫15分（37℃，pH9.9）對ALP活性的影響
○與●表示肝ALP活性不預溫和預溫的變化
△與▲表示血清ALP活性不預溫和預溫的變化
圖17-5形象說明預溫過程對酶活性的影響。
目前常規(guī)工作實驗室越來越多的使用37℃，一些國家已明確推薦使用此溫度。這更多地是從實際工作方便來考慮。因為溫度升高，反應速度快，靈敏度高。同時延滯時間和測定時間都可能縮短。從而有利于提高工作效率。尤其目前在常規(guī)實驗室中廣泛使用全自動生化分析儀，有高效率的恒溫系統(tǒng)，使反應系統(tǒng)很快升溫并維持在37℃，可避免溫度差異引起的誤差。但在37℃時，不可避免地一些酶可能失活。
早期曾推薦使用25℃為酶測定溫度，其優(yōu)點為接近室溫，反應體系溫度很容易平衡到此溫度，這對于當時使用無有效控溫系統(tǒng)的分光光度計來測酶活化性有其特別方便之處。但溫度低。反應太慢。在有些溫熱地區(qū)，當室溫超過25℃時，還需使用降溫系統(tǒng)很不方便。因此目前已很少有實驗室采用此溫度。
IFCC推薦的30℃，兼顧了上述二溫度的優(yōu)點，即保證了一定的反應速度。又無酶失活之擾，此外還有一個上述二溫度沒有的優(yōu)點，即可以鎵作為此溫度的基準物質(zhì)，純鎵的熔點為29.77℃。保證了測定系統(tǒng)計30℃的高度準確性，而37℃和25℃至今尚無一個最準確的確定方法。
30℃和37℃是目前使用最廣泛的二種測定酶的使用的溫度。在比較不同實驗室測定結(jié)果時，一定要注意由此引起來的差異，否則將導致臨床診斷的困難和誤差。一些作者提出使用二溫度間的轉(zhuǎn)換系數(shù)使二溫度測定結(jié)果的比較變?yōu)榭杀?。雖然一些作者持懷疑態(tài)度，用一個系數(shù)能代表所有標本中的變化情況嗎？最新研究證實只要所用方法合適，人類血清中酶對溫度變化的反應差異不大，在無法統(tǒng)一溫度情況下，這還不失為一權(quán)宜之計，常用酶的溫度轉(zhuǎn)換系數(shù)可參見表17-4：
表17-4 常見酶溫度轉(zhuǎn)化系數(shù)
| 25℃ | 30℃ | 37℃ | |
| CK | 0.64 | 1.00 | 1.56 |
| LD | 0.75 | 1.00 | 1.44 |
| ALT | 0.76 | 1.00 | 1.38 |
| AST | 0.73 | 1.00 | 1.52 |
| ALP | 0.78 | 1.00 | 1.30 |
| GGT | 0.73 | 1.00 | 1.31 |
| CHE | 0.81 | 1.00 | 1.26 |
| HBDH | 0.85 | 1.00 | 1.10 |
不論選用何種溫度測酶，由于酶反應受溫度影響很大，在測定時間內(nèi)，反應體系的溫度變化應控制在±0.1℃內(nèi)。應用國產(chǎn)普通恒溫水浴箱來測酶活性是不合適的，應使用帶有攪拌器的高級恒溫水浴。
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