臨床生物化學/核酸一級結(jié)構(gòu)（核苷酸序列sequence）分析
| 醫(yī)學電子書 >> 《臨床生物化學》 >> 診斷分子生物學基本技術(shù) >> 分子生物學實驗診斷技術(shù) >> 核酸一級結(jié)構(gòu)（核苷酸序列sequence）分析 |
| 臨床生物化學 |
|
|
|
核酸一級結(jié)構(gòu)分析是基因分析最直接的第一手資料。目前DNA、RNA以及蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)分析中，DNA的堿基序列分析方法多樣、簡單、快速。下面就M13噬菌體-雙脫氧核苷酸（ddNTP）的DNA測序法介紹如下。
M13是單鏈DNA噬菌體，轉(zhuǎn)染宿主菌體復制為雙鏈增殖，又以單鏈形式透出菌體。把待測DNA重組插入雙鏈M13復制型DNA中，經(jīng)培養(yǎng)擴增，可分離得到單鏈M13DNA（含待測單鏈DNA的堿基序列），即復制模板。在待測DNA的3′端人工合成引物，在DNA聚合酶Ⅰ作用下，復制鏈延長。在ddNTP（2′,3′雙脫氧核糖核苷三磷酸）存在下，復制延長隨機受阻，形成分子量（長度）大小不等的片段。電泳分離，自顯影，讀圖18-9分析堿基序列。
圖18-9 核酸堿基序列分析
0.2-0.3mm厚度聚丙烯酰胺-尿素凝膠，高壓（1600V）電泳，可分辨一個核苷酸的差異。電泳后干燥凝膠，自顯影，自下往上讀圖，得到5′→3′的合成鏈堿基序列，其互補鏈是待測DNA的3′→5′堿基序列。
 核酸限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析 | 診斷分子生物學技術(shù)的臨床應用  |
出自A+醫(yī)學百科 “臨床生物化學/核酸一級結(jié)構(gòu)（核苷酸序列sequence）分析”條目 http://www.yibo008.com/w/%E4%B8%B4%E5%BA%8A%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E4%B8%80%E7%BA%A7%E7%BB%93%E6%9E%84%EF%BC%88%E6%A0%B8%E8%8B%B7%E9%85%B8%E5%BA%8F%E5%88%97sequence%EF%BC%89%E5%88%86%E6%9E%90 轉(zhuǎn)載請保留此鏈接
| 關(guān)于“臨床生物化學/核酸一級結(jié)構(gòu)（核苷酸序列sequence）分析”的留言： |  訂閱討論RSS
|
|
目前暫無留言 | |
| 添加留言 | |