終止密碼子
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終止密碼: UAG,UAA,UGA是終止密碼子?! ?/p>
發(fā)現(xiàn)過程
1964年Yanofsky在研究E.coli色氨酸合成酶A蛋白時(shí)推測無義密碼子的存在。他的推測/是從兩個不同的角度:一是為trp A編碼的mRNA還編碼了trpB,trpC,trpD和trpE。即一個mRNA 分子中可以作為不同多肽的模板,那么有可能在翻譯時(shí)中途在某個位點(diǎn)(兩個肽的連接處〕停止,然后再從下一個的起點(diǎn)翻譯,這樣使各個肽可以分開,而不至于產(chǎn)生一條很長的肽鏈。這就意味著終止密碼子的存在。另一個角度是他發(fā)現(xiàn)E.coli Trp-的突變株是不能合成完整的色氨酸合成酶蛋白,但繼續(xù)對它進(jìn)行誘變可以得到回復(fù)突變?;貜?fù)突變中有兩種,一種是個別發(fā)生了變化,而另一種是完全回復(fù),沒有任何氨基酸組成的變化,這表明,E.coliTrp-不可能是任何移碼突變的結(jié)果,那么這類的突變很可能攜帶有阻止合成的無義密碼子。
1962年Benzer和他的學(xué)生S.Champe對T4 r Ⅱ突變的研究時(shí)發(fā)現(xiàn)野生型的T4rⅡ這段有兩個順反子rⅡA和rⅡB,共同轉(zhuǎn)錄一個順反子mRNA,但翻譯成兩個分開的蛋白A和B。當(dāng)發(fā)生缺失突變時(shí),其中有一個突變型為r l589,證明是缺失所造成,缺失的區(qū)域含rⅡA基因右邊的大部分,和rⅡB左邊的小部分?;パa(bǔ)實(shí)驗(yàn)表明rl589的產(chǎn)物是一條多肽,但無蛋白A的活性,但有B蛋白的活性。Benzer認(rèn)為,這種缺失可能使mRNA失去了A蛋白合成“終止”和“B”蛋白合成“起始”的密碼子,因此翻譯時(shí)沿著一條mRNA閱讀下去,產(chǎn)生了一條長的肽鏈。
1964年Brenner及其同事獲得了T4噬菌體編碼頭部蛋白基因的琥珀突變(amber),并進(jìn)行了精細(xì)作圖,并分離研究了各種突變型的多肽。突變型的肽鏈比野生型的要短,因此可以推測琥珀突變可能產(chǎn)生終止密碼子,使肽的合成在中途停止下來;由于突變位點(diǎn)越靠近基因的左端,所產(chǎn)生的肽鏈越短,越靠近右端越接近野生型,據(jù)此可以推測翻譯的過程是從mRNA的5’端向3’閱讀。肽鏈的合成是從N端向C端延伸。
由于頭部蛋白80%是由新合成的蛋白質(zhì)組成。因此他們將各種突變型及野生型T4噬菌體侵染E.coli后10分鐘,把14C標(biāo)記的氨基酸加到培養(yǎng)基中,過一段時(shí)間,從感染的E.coli 中抽提蛋白,頭部蛋白可以通過14C標(biāo)記來加以鑒別?! ?/p>
實(shí)驗(yàn)方法
他們的實(shí)驗(yàn)方法不是對各種突變型的產(chǎn)物測序,而是先將野生型的頭部蛋白用胰蛋白酶和糜蛋白酶來處理,消化后所產(chǎn)生的極復(fù)雜的混合物中,通過電泳能分離、鑒定出8個各有特征的頭部蛋白蛋白片段,分別是Cys, T7C(His), C12b(Tyr), T6(Trp), T2a(Pro), T2(Trp), C2(Tyr)和C5(His)片段。然后再測出各T4頭部蛋白突變型產(chǎn)物含有幾個以上的肽段來排序。表示排序的結(jié)果和精細(xì)作圖的序列相一致,不僅表明了基因和蛋白質(zhì)的共線性關(guān)系,同時(shí)證明突變型頭部蛋白基因內(nèi)有無義突變的存在,其位置應(yīng)在各種突變產(chǎn)物的末端?! ?/p>
關(guān)鍵破譯
直到1965年Weigert,M.和Ggaren,A由堿性磷酸酶基因中色氨酸位點(diǎn)的氨基酸的置換證明E.coli中無義密碼子的堿基組成揭示了琥珀和赭石(ochre)突變基因分別是終止密碼子UAG和UAA。當(dāng)時(shí)64個密碼中的61個已破譯,只留下了UAA、UAG 和UGA有待確定。Garen等為了鑒定無義密碼子采用了和Brenner相似的策略。他們從E.coli的堿性磷酸酯酶基因 (pho A)中的一個無義突變品系中分離了大量的回復(fù)突變株,然后來探察每一個無義突變中在多肽中相當(dāng)于已回復(fù)的無義密碼子位置上的氨基酸究竟是什么氨基酸。可以看出無義密碼子是從該基因的色氨酸位點(diǎn)的密碼子產(chǎn)生的。在回復(fù)突變中,無義密碼子變成了Trp、Ser、Tyr、Leu、Glu、Gln和Lys的相應(yīng)密碼子。僅有Trp的UGG變成UAG,然后在此基礎(chǔ)上回復(fù)突變成7種氨基酸,因此Trp 產(chǎn)生的無義突變的密碼子就是UAG。最后1967年Brennr和Crick證明UGA是第三個無義密碼子。根據(jù)無義突變的三種昵稱,三個終止密碼子UAA叫赭石(ochre)密碼子(相應(yīng)于赭石突變);UAG叫琥珀密碼子(相應(yīng)于琥珀突變);UGA叫蛋白石(opal)密碼子(相應(yīng)于蛋白石突變)。
最近研究發(fā)現(xiàn)線粒體和葉綠體使用的遺傳密碼稍有差異,線粒體和葉綠體的終止子有四個,是UAA,UAG,AGA,AGG
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